微生物控制菌檢查:梭菌
發(fā)布時(shí)間：
2022-12-27
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控制菌檢查:梭菌
1.供試液的制備和增菌培養(yǎng)
取供試品,按照“非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查制成1:10供試液”.取相當(dāng)于1g或1ml供試品的供試液2份,其中1份置80℃保溫10分鐘后迅速冷卻.
2.增菌,選擇和分離培養(yǎng)
將上述2份供試液分別接種至適宜體積(經(jīng)方法適用性試驗(yàn)確定)的梭菌增菌培養(yǎng)基中,置厭氧條件下30-35℃培養(yǎng)48小時(shí),取上述每一培養(yǎng)物少量,分別涂抹接種于哥倫比亞血瓊脂平板上,置厭氧條件下30-35℃培養(yǎng)48-72小時(shí).
3.過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)
取上述平板上生長(zhǎng)的菌落,置潔凈玻片上,滴加3%過(guò)氧化氫試液,若菌落表面有氣泡產(chǎn)生,為過(guò)氧化氫酶陽(yáng)性,否則為陰性.
4.結(jié)果判斷
若哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基平板上有厭氧桿菌生長(zhǎng)(有或無(wú)芽孢),且過(guò)氧化氫酶反應(yīng)陰性,應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行適宜的鑒定試驗(yàn),確證是否為梭菌,如果哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基平板上沒(méi)有厭氧桿菌生長(zhǎng),或過(guò)氧化酶反應(yīng)陽(yáng)性,判供試品未檢出梭菌.
5涉及培養(yǎng)基
5.1梭菌增菌培養(yǎng)基
Peptone(胨)10.0g
BeefExtract(牛肉浸出粉)10.0g
YeastExtract(酵母浸出粉)3.0g
SolubleStarch(可溶性淀粉)1.0g
(鹽酸半胱氨酸)0.5g
SodiumChloride(氯化鈉)5.0g
SodiumAcetate(乙酸鈉)3.0g
Dextrose(葡萄糖)5.0g
Agar(瓊脂)0.5g
pH6.8±0.2(25℃)
5.2哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基
(胰酪胨)10.0g
(氯化鈉)5.0g
(肉胃蛋白酶水解物)5.0g
(酵母浸出粉)5.0g
(心胰酶水解物)3.0g
(玉米淀粉)1.0g
(瓊脂)15.0g
pH7.3±0.2(25℃)
稱取本品44.0g于1L蒸餾水或去離子水中(可按比例增加或減少配制量),加熱煮沸至完全溶解,分裝,121℃高壓滅菌15分鐘.如有必要,冷卻至45-50℃,每100ml培養(yǎng)基中添加1支20102(硫酸慶大霉素),搖勻,備用.
5.3硫酸慶大霉素
該品為氨基糖甙類廣譜抗生素,對(duì)多種革蘭陰性菌及陽(yáng)性菌都具有抑菌和殺菌作用.對(duì)綠膿桿菌,產(chǎn)氣桿菌,肺炎桿菌,沙門(mén)氏菌屬,大腸桿菌及變形桿菌等革蘭陰性菌和金葡菌等作用較強(qiáng).
6梭菌
芽孢桿菌科的1屬.是能形成芽孢,厭氧生長(zhǎng)的革蘭氏染色陽(yáng)性大桿菌.一般為專性厭氧,多數(shù)借周生鞭毛運(yùn)動(dòng).因其芽孢直徑較大,常使細(xì)胞中間膨大呈梭狀,故名.細(xì)胞大小約0.3μm×1.9μm-2μm×10μm.不能還原硫酸鹽.多數(shù)過(guò)氧化氫酶陰性.化能異養(yǎng),營(yíng)養(yǎng)要求較高,肉渣培養(yǎng)基中生長(zhǎng)混濁,部分肉渣消化并產(chǎn)生氣體.廣泛地分布于土壤,污泥,人和動(dòng)物的腸道等處.
常見(jiàn)致病菌：如破傷風(fēng)梭菌(C.tetani),產(chǎn)氣莢膜梭菌(C.perfringens)和肉毒梭菌(C.botulinum)等,產(chǎn)氣莢膜羧菌是人類氣性壞疽的主要病原菌.1892年,美國(guó)病理學(xué)家W.H.韋爾奇等自一尸體分出本菌,因而又稱韋氏梭菌.菌體較大,大小為(0.9-1.3)×(3.0-9.0)微米,無(wú)鞭毛,有莢膜.芽孢橢圓形,位于偏端.專性厭氧.菌落直徑2-5毫米,血瓊脂平板上有溶血圈.糖發(fā)酵能力強(qiáng),產(chǎn)酸產(chǎn)氣.本菌的特征之一是在牛乳培養(yǎng)基中呈暴烈發(fā)酵現(xiàn)象.形成的毒性物質(zhì)有12種,可損傷細(xì)胞膜,血管內(nèi)皮細(xì)胞并使糖類分解,導(dǎo)致細(xì)胞壞死,組織水腫,充氣等病變.
來(lái)自：青島日水培養(yǎng)基