細(xì)菌抗酸性染色法的方法和原理
發(fā)布時(shí)間：
2022-12-27
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細(xì)菌抗酸性染色法的方法和原理
細(xì)菌抗酸染色法(又稱耐酸染色法)是檢查抗酸細(xì)菌(如結(jié)核桿菌、麻風(fēng)桿菌、分支桿菌等)的一種特殊染色法,屬于復(fù)染色法.細(xì)菌抗酸染色的方法很多,常用的是先以濃石炭酸復(fù)紅加溫初染,隨即以鹽酸酒精或硫酸水脫色,最后用美藍(lán)液復(fù)染.
一、抗酸染色液的配制
1、石炭酸品紅(復(fù)紅)染色液
堿性品紅:0.3克 95%乙醇:10毫升 5%酚水溶液:90毫升
將品紅溶解于乙醇中,然后與酚溶液混合.
2、3%鹽酸-乙醇 濃鹽酸:3毫升 95%乙醇:97毫升
3、呂氏堿性美藍(lán)染色液 美藍(lán)(亞甲基藍(lán)):0.3克 95%乙醇:30毫升 0.01%氫氧化鉀溶液:100毫升
將美藍(lán)溶解于乙醇中,然后與氫氧化鉀溶液混合.
二、抗酸染色方法
(1)將涂片在火焰上加熱固定,滴加較多量的石炭酸品紅染色液,在玻片下以酒精燈火焰緩緩加熱至有蒸氣出現(xiàn),維持微微發(fā)生蒸汽,但切不可使沸騰.染液如因蒸發(fā)減少時(shí),應(yīng)隨時(shí)添加.染5分鐘,傾去染液,水洗.(2)滴加3%鹽酸-乙醇脫色,直至無紅色脫落為止(所需時(shí)間視涂片厚薄而定,一般為1-3分鐘),充分水洗.(3)滴加呂氏堿性美藍(lán)染色液,復(fù)染約30-60s,水洗.(4)吸干或烘干,鏡檢.
三、抗酸染色結(jié)果
如屬于抗酸細(xì)菌,因菌體有抗御酸類脫色的特性,故能保持初染的紅色.其他細(xì)菌、細(xì)胞等物質(zhì)因無抗酸能力,初染的紅色被酸類所脫去,故被復(fù)染成藍(lán)色.
多數(shù)細(xì)菌可用單染法或革蘭氏染色法而著色,但有少數(shù)細(xì)菌,尤其是分枝桿菌屬(Mycobacterium)細(xì)菌剛需要用抗酸性染色法進(jìn)行觀察.如分枝桿菌屬中的結(jié)核桿菌(Mycobacterium tuberculosis)和麻瘋桿菌(Mycobacterium leprae),用抗酸染色法極具診斷價(jià)值.
分枝桿菌與其它細(xì)菌不同,其細(xì)胞壁含有厚的脂質(zhì),染料不易滲透.但一經(jīng)滲透,也不為酸性酒精脫色,故稱之為抗酸性.其它細(xì)菌剛易被酸性酒精所脫色,屬于非抗酸性.