微生物培養(yǎng)基的制備原則
發(fā)布時間：
2022-12-27
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微生物培養(yǎng)基的制備原則
微生物培養(yǎng)基是微生物試驗的基礎(chǔ),直接影響微生物試驗結(jié)果.適宜的微生物培養(yǎng)基制備方法是提供優(yōu)質(zhì)微生物培養(yǎng)基的保證.
微生物實驗室使用的微生物培養(yǎng)基可按處方配制,也可使用按處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水微生物培養(yǎng)基.在制備微生物培養(yǎng)基時,應(yīng)選擇質(zhì)量符合要求的脫水微生物培養(yǎng)基或單獨配方組分進行配制.脫水微生物培養(yǎng)基應(yīng)附有處方和使用說明,配制時應(yīng)按使用說明上的要求操作以確保微生物培養(yǎng)基的質(zhì)量符合要求,不得使用結(jié)塊或顏色發(fā)生改變的脫水微生物培養(yǎng)基.脫水微生物培養(yǎng)基或單獨配方組分應(yīng)在適當(dāng)?shù)臈l件下貯藏,如低溫、干燥和避光,所有的容器應(yīng)密封,尤其是盛放脫水微生物培養(yǎng)基的容器.商品化的成品微生物培養(yǎng)基除了應(yīng)附有處方和使用說明外,還應(yīng)注明有效期、貯藏條件、適用性檢查試驗的質(zhì)控菌和用途.
為保證微生物培養(yǎng)基質(zhì)量的穩(wěn)定可靠,各脫水微生物培養(yǎng)基或各配方組分應(yīng)準確稱量,并要求有一定的精確度.配制微生物培養(yǎng)基最常用的溶劑是純化水.應(yīng)記錄各稱量物的重量和水的使用量.配制微生物培養(yǎng)基所用容器不得影響微生物培養(yǎng)基質(zhì)量,一般為玻璃容器.微生物培養(yǎng)基配制所用的容器和配套器具應(yīng)潔凈,可用純化水沖洗玻璃器皿以消除清潔劑和外來物質(zhì)的殘留.對熱敏感的微生物培養(yǎng)基如糖發(fā)酵微生物培養(yǎng)基其分裝容器一般應(yīng)預(yù)先進行滅菌,以保證微生物培養(yǎng)基的無菌性.脫水微生物培養(yǎng)基應(yīng)完全溶解于水中,再行分裝與滅菌.配制時若需要加熱助溶,應(yīng)注意不要過度加熱,以避免微生物培養(yǎng)基顏色變深.如需要添加其他組分時,加入后應(yīng)充分混勻.
應(yīng)按照生產(chǎn)商提供或使用者驗證的參數(shù)進行微生物培養(yǎng)基的滅菌.商品化的成品微生物培養(yǎng)基必須附有所用滅菌方法的資料.微生物培養(yǎng)基滅菌一般采用濕熱滅菌技術(shù),特殊微生物培養(yǎng)基可采用薄膜過濾除菌.微生物培養(yǎng)基若采用不適當(dāng)?shù)募訜岷蜏缇鷹l件,有可能引起顏色變化、透明度降低、瓊脂凝固力或pH 的改變.因此,微生物培養(yǎng)基應(yīng)采用驗證的滅菌程序滅菌,微生物培養(yǎng)基滅菌方法和條件,應(yīng)通過無菌性試驗和促生長試驗進行驗證.此外,對高壓滅菌器的蒸汽循環(huán)系統(tǒng)也要加以驗證,以保證在一定裝載方式下的正常熱分布.溫度緩慢上升的高壓滅菌器可能導(dǎo)致微生物培養(yǎng)基的過熱,過度滅菌可能會破壞絕大多數(shù)的細菌和真菌微生物培養(yǎng)基促生長的質(zhì)量.滅菌器中微生物培養(yǎng)基的容積和裝載方式也將影響加熱的速度.因此,應(yīng)根據(jù)滅菌微生物培養(yǎng)基的特性,進行全面的滅菌程序驗證.應(yīng)確定每批微生物培養(yǎng)基滅菌后的pH 值(冷卻至室溫25攝氏度測定).若微生物培養(yǎng)基處方中未列出pH 值的范圍,除非經(jīng)驗證表明微生物培養(yǎng)基的pH 值允許的變化范圍很寬,否則,pH 值的范圍不能超過規(guī)定值±0.2.制成平板或分裝于試管的微生物培養(yǎng)基應(yīng)進行下列檢查：容器和蓋子不得破裂,裝量應(yīng)相同,盡量避免形成氣泡,固體微生物培養(yǎng)基表面不得產(chǎn)生裂縫或漣漪,在冷藏溫度下不得形成結(jié)晶,不得污染微生物等.應(yīng)檢查和記錄批數(shù)量、有效期及微生物培養(yǎng)基的無菌檢查.