病毒細(xì)胞培養(yǎng)法及病變觀察

發(fā)布時(shí)間：

2022-12-27

作者：

國(guó)內(nèi)比較有名的培養(yǎng)基公司

病毒細(xì)胞培養(yǎng)法及病變觀察

細(xì)胞培養(yǎng)法是目前培養(yǎng)病毒應(yīng)用最廣的一種培養(yǎng)方法,其優(yōu)點(diǎn)是1 經(jīng)濟(jì)適用,結(jié)果正確且敏感；2 較實(shí)驗(yàn)動(dòng)物易于控制.細(xì)胞培養(yǎng)法多應(yīng)用于病毒的分離培養(yǎng),進(jìn)行血清中和試驗(yàn)及制造疫苗和抗原等方面.很多組織細(xì)胞,包括雞胚、鼠胚、各種動(dòng)物的腎組織細(xì)胞,人胚羊膜組織細(xì)胞或流產(chǎn)胎兒組織細(xì)胞應(yīng)在死后6小時(shí)內(nèi)采取,因時(shí)間過長(zhǎng),組織細(xì)胞生長(zhǎng)成功率下降等均可作細(xì)胞培養(yǎng)的來源.

細(xì)胞的選擇主要依據(jù)組織細(xì)胞對(duì)病毒的敏感性.能引起病變的組織細(xì)胞,往往取自病毒的自然宿主,特別是引起疾病的宿主的某些臟器組織細(xì)胞.人類病毒,用人或猴的組織細(xì)胞較敏感,但這不是絕對(duì)的,如地鼠腎細(xì)胞較人腎細(xì)胞對(duì)流行性乙型腦炎病毒敏感.

一原代細(xì)胞培養(yǎng)法

材料

9～10日齡雞胚、Hanks氏溶液、0.25％胰酶溶液、無(wú)菌小剪、鑷子、無(wú)菌培養(yǎng)皿、毛細(xì)吸管、吸管、沉淀管、無(wú)菌細(xì)胞培養(yǎng)管抗生素空瓶、100ml無(wú)菌玻璃瓶或三角燒瓶、備有四層紗布的玻璃漏斗.

方法

用碘酒消毒雞胚蛋氣室外殼,并將它直立于蛋架上,以鑷子將雞胚取出放入無(wú)菌培養(yǎng)皿內(nèi),去頭爪及內(nèi)臟.

用小剪在培養(yǎng)皿內(nèi)將胚胎剪成小塊4～5mm3 ,加Hanks氏溶液約10ml 沖洗,靜置1～2分鐘后,用毛細(xì)吸管吸取液體.依同法再洗滌2次,將血球充分洗去.

用鑷子將組織塊放入無(wú)菌玻璃瓶或三角燒瓶?jī)?nèi),加入10～15ml0.25％胰酶溶液,37攝氏度水浴20分鐘,中間搖動(dòng)幾次.由于胰酶的作用可使大量細(xì)胞游離,液體變混.經(jīng)四層紗布過濾后的細(xì)胞懸液,低速離心沉淀1000轉(zhuǎn)/分以內(nèi) 5分鐘,吸取上清液,沉淀物加入適量營(yíng)養(yǎng)液,用白細(xì)胞計(jì)數(shù)的方法進(jìn)行計(jì)數(shù),使成每ml含50～80萬(wàn)細(xì)胞懸液以作單層細(xì)胞培養(yǎng).

每一細(xì)胞培養(yǎng)管,注入細(xì)胞懸液1ml,蓋好瓶塞,并將瓶略加搖動(dòng),橫臥于有槽木架上,使細(xì)胞均勻平鋪于管壁.置37攝氏度溫箱孵育,一般4小時(shí),細(xì)胞附著于管壁,48小時(shí)可長(zhǎng)成單層,此時(shí)即可調(diào)換營(yíng)養(yǎng)液,接種病毒.

二傳代細(xì)胞培養(yǎng)法

從人及動(dòng)物組織,特別是腫瘤組織,經(jīng)過多次傳代可建立傳代細(xì)胞系.這種細(xì)胞能無(wú)限地傳代,但并不是所有的組織細(xì)胞都能建立傳代細(xì)胞.有一些傳代細(xì)胞對(duì)病毒敏感范圍較廣,曾被利用作病毒的分離和鑒定.如HeLa細(xì)胞,Hep－2細(xì)胞及KB細(xì)胞.HeLa細(xì)胞對(duì)脊髓灰質(zhì)炎三型病毒,腺病毒及大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)的ECHO病毒都敏感.Hep－2細(xì)胞也曾用來分離脊髓灰質(zhì)炎病毒、柯薩奇A組病毒、腺病毒、RS病毒.HeLa細(xì)胞來自子宮頸癌,Hep－2細(xì)胞來自喉癌,而KB細(xì)胞來自上腭癌.由于傳代細(xì)胞有致腫瘤作用,目前僅用做病毒的分離鑒定及一些病毒學(xué)的研究而不能用于疫苗的生產(chǎn).

材料

單層細(xì)胞培養(yǎng)瓶,營(yíng)養(yǎng)液,0.25％胰蛋白酶溶液,無(wú)菌吸管,無(wú)菌細(xì)胞瓶.

方法

將成片細(xì)胞的生長(zhǎng)液倒掉,用Hanks液洗一次.

加入適量的0.25％胰蛋白酶,37攝氏度孵育1分鐘.

將細(xì)胞瓶倒放,細(xì)胞在上,胰酶在下,繼續(xù)孵育37攝氏度5～10分鐘.

將胰蛋白酶倒掉,再加入原量的生長(zhǎng)液,用10ml吸管吹打分散細(xì)胞.

用生長(zhǎng)液按原量3～4倍稀釋,即一瓶細(xì)胞能傳3～4瓶.

三細(xì)胞培養(yǎng)接種病毒的方法及病變觀察

材料

單層細(xì)胞培養(yǎng)管、營(yíng)養(yǎng)液、Hanks溶液、無(wú)菌毛細(xì)滴管和腺病毒稀釋液.

方法