單克隆菌落的定義和篩選
發(fā)布時間：
2022-12-27
作者：
做培養(yǎng)基好的廠家
單克隆菌落的定義和篩選
單個細菌在固體培養(yǎng)基上繁殖后，會形成一個肉眼可見的子代（子細胞）群體，這個群體就是單克隆菌落。它包含有很多個細菌，并且是同一個細菌的后代。
挑選單克隆菌落時注意哪些事項？
選單克隆時可以選取邊緣顆粒較大的菌落。 菌落通常很密集很小，很難挑選單克隆。準備好無抗生素LB液體培養(yǎng)基，抗生素 ，7ml (非4ml)管。在做轉(zhuǎn)化試驗或者是涂平板時，必需從長出的菌中挑取單菌落。
單菌落是由一個菌體分裂產(chǎn)生的，菌落內(nèi)的所有菌體幾乎一樣，都包含有轉(zhuǎn)化進去的目標質(zhì)粒，所以才能在平板篩選壓力下生長。假如在操作過程中混雜入污染的雜菌或者轉(zhuǎn)化入其他質(zhì)粒（比如使用的器材污染等）也可能會在平板上意外生長，若將其和期望的重組子一起挑出來的話，最后將得不到質(zhì)?；蛘叩玫降馁|(zhì)粒是不純的，所以這也是抽出來的質(zhì)粒還要鑒定的原因。
理論上單克隆菌落應該是基因型，或者菌株有些特別，易突變。菌株之間有粘連，劃線可能沒有得到單克隆?？梢栽囋嚾∫稽c菌液，用培養(yǎng)基稀釋，吹打，再涂板試一下。盡可能的讓菌長得少一些。如何獲得真正意義上的單克隆菌落？用接種環(huán)在平板上劃一下（不要管是不是單菌落），然后洗到培養(yǎng)基里面，加抗生素重新涂平板，然后再挑單菌落，效果不錯，切記接種環(huán)劃得菌不宜太多，點到為止。
篩選出來的菌落不可能是百分百純的，所以分別挑單克隆然后再鑒定。而且在搖菌的過程中需要保種。鑒定無誤的話，保種的就可以用于以后的擴增。
有時候因為人為操作失誤，也會導致挑的不是單菌落。一般我們用酶切進行驗證質(zhì)粒。如果不是單菌落的話，酶切圖譜上可以很容易就看出來的。這個時候你需要把原來保存的挑菌發(fā)酵的菌種重新劃單菌落去進行純化。
來自:qdrishui