食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定
發(fā)布時(shí)間：
2022-12-27
作者：
GB 4789.2-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定
2016-12-23發(fā)布 2017-06-23實(shí)施
中華人民共和國國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)國家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布
GB4789.2—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測(cè)定》
前言：
本標(biāo)準(zhǔn)代替GB4789.2—2010《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測(cè)定》.
范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中菌落總數(shù)(Aerobic plate count)的測(cè)定方法.
本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中菌落總數(shù)的測(cè)定.
術(shù)語和定義
菌落總數(shù) aerobic plate count
食品檢樣經(jīng)過處理,在一定條件下(如培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間等)培養(yǎng)后,所得每g(毫升)檢樣中形成的微生物菌落總數(shù).
設(shè)備和材料
除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外,其他設(shè)備和材料如下:
恒溫培養(yǎng)箱:36攝氏度±1攝氏度,30攝氏度±1攝氏度.
冰箱:2攝氏度至5攝氏度.
恒溫水浴箱:46攝氏度±1攝氏度.
天平:感量為0.1g.
均質(zhì)器.
振蕩器.
無菌吸管:1毫升(具0.01毫升刻度)、10毫升(具0.1毫升刻度)或微量移液器及吸頭.
無菌錐形瓶:容量250毫升、500毫升.
無菌培養(yǎng)皿:直徑90毫米.
pH計(jì)或pH比色管或精密pH試紙.
放大鏡或/和菌落計(jì)數(shù)器.
培養(yǎng)基和試劑
平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基
磷酸鹽緩沖液
無菌生理鹽水
檢驗(yàn)程序
菌落總數(shù)的檢驗(yàn)程序見圖1.
操作步驟
樣品的稀釋
固體和半固體樣品:稱取25g樣品置盛有225毫升磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi),8000r/分鐘至10000r/分鐘均質(zhì)1分鐘至2分鐘,或放入盛有225毫升稀釋液的無菌均質(zhì)袋中,用拍擊式均質(zhì)器拍打1分鐘至2分鐘,制成1∶10的樣品勻液.
液體樣品:以無菌吸管吸取25毫升樣品置盛有225毫升磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶(瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠)中,充分混勻,制成1∶10的樣品勻液.
用1毫升無菌吸管或微量移液器吸取1∶10樣品勻液1毫升,沿管壁緩慢注于盛有9毫升稀釋液的無菌試管中(注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面),振搖試管或換用1
支無菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻,制成1∶100的樣品勻液.
按6.1.3操作,制備10倍系列稀釋樣品勻液.每遞增稀釋一次,換用1次1毫升無菌吸管或吸頭.
根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì),選擇2個(gè)至3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括液),在進(jìn)行10倍遞增稀釋時(shí),吸取1毫升樣品勻液于無菌平皿內(nèi),每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿.同時(shí),分別吸取1毫升空白稀釋液加入兩個(gè)無菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照.
及時(shí)將15毫升至20毫升冷卻至46攝氏度的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基(可放置于46攝氏度±1攝氏度恒溫水浴箱中保溫)傾注平皿,并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻.
培養(yǎng)
待瓊脂凝固后,將平板翻轉(zhuǎn),36攝氏度±1培養(yǎng)48h±2h.
水產(chǎn)品30攝氏度±1攝氏度培養(yǎng)72h±3h.
如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長的菌落時(shí),可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基(約4毫升),凝固后翻轉(zhuǎn)平板,按6.2.1條件進(jìn)行培養(yǎng).
菌落計(jì)數(shù)
可用肉眼觀察,必要時(shí)用放大鏡或菌落計(jì)數(shù)器,記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量.菌落計(jì)數(shù)以菌落形成單位(colony-for分鐘gunits,CFU)表示.
選取菌落數(shù)在30CFU至300CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù).低于3
0CFU的平板記錄具體菌落數(shù),大于300CFU的可記錄為多不可計(jì).每個(gè)稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù).
其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長時(shí),則不宜采用,而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù);若片狀菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均勻,即可計(jì)半個(gè)平板后乘以2,代表一個(gè)平板菌落數(shù).
當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界線的鏈狀生長時(shí),則將每條單鏈作為一個(gè)菌落計(jì)數(shù).
結(jié)果與報(bào)告
菌落總數(shù)的計(jì)算方法
若只有一個(gè)稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi),計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值,再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù),作為每g(毫升)樣品中菌落總數(shù)結(jié)果.
若有兩個(gè)連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)時(shí),按式(1)計(jì)算:
N =ΣC/(n1+0.1n2)d (1)
式中:N :樣品中菌落數(shù);
ΣC:平板(含適宜范圍菌落數(shù)的平板)菌落數(shù)之和;
n1:第一稀釋度(低稀釋倍數(shù))平板個(gè)數(shù);
n2:第二稀釋度(高稀釋倍數(shù))平板個(gè)數(shù);
d :稀釋因子(第一稀釋度).
若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于300CFU,則對(duì)稀釋度最高的平板進(jìn)行計(jì)數(shù),其他平板可記錄為多不可計(jì),結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)算.
若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于30CFU,則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算.
若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無菌落生長,則以小于1
乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算.
若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在30CFU至300CFU之間,其中一部分小于30CFU
或大于300CFU時(shí),則以最接近30CFU或300CFU的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算.
菌落總數(shù)的報(bào)告
菌落數(shù)小于100CFU時(shí),按“四舍五入”原則修約,以整數(shù)報(bào)告.
菌落數(shù)大于或等于100CFU時(shí),第3位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后,取前2位數(shù)字后面用0代替位數(shù);也可用10的指數(shù)形式來表示,按“四舍五入”原則修約后,采用兩位有效數(shù)字.
若所有平板上為蔓延菌落而無法計(jì)數(shù),則報(bào)告菌落蔓延.
若空白對(duì)照上有菌落生長,則此次檢測(cè)結(jié)果無效.
稱重取樣以CFU/g為單位報(bào)告,體積取樣以CFU/毫升為單位報(bào)告.
附錄 A
培養(yǎng)基和試劑
平板計(jì)數(shù)瓊脂(plate count agar,PCA)
培養(yǎng)基
成分
胰蛋白胨 5.0g
酵母浸膏 2.5g
葡萄糖 1.0g
瓊脂 15.0g
蒸餾水 1000毫升
制法
將上述成分加于蒸餾水中,煮沸溶解,調(diào)節(jié)pH值7.0±0.2.分裝試管或錐形瓶,121 攝氏度高壓滅菌15分鐘.
成分
磷酸二氫鉀(KH2PO4) 34.0g
蒸餾水 500毫升
制法
貯存液:稱取34.0g的磷酸二氫鉀溶于500毫升蒸餾水中,用大約175毫升的1mol/L
液調(diào)節(jié)pH到7.2,用蒸餾水稀釋到1000毫升后貯存于冰箱.稀釋液:取貯存液1.25 毫升,用蒸餾水稀釋到1000 毫升,分裝于適宜容器中,121 攝氏度高壓滅菌15分鐘.
無菌生理鹽水
成分
氯化鈉 8.5g
蒸餾水 1000毫升
制法
稱取8.5g氯化鈉溶于1000毫升蒸餾水中,121攝氏度高壓滅菌15分鐘.