實(shí)驗(yàn)室常用培養(yǎng)基的配制方法有哪些？
發(fā)布時(shí)間：
2022-12-24
作者：
國產(chǎn)培養(yǎng)基
實(shí)驗(yàn)室常用培養(yǎng)基的配制方法
Ampicillin
(100 mg/ml)
· 組份濃度 100 mg/ml Ampicillin
· 配制量 50 ml
· 配制方法 1. 稱量 5 g Ampicillin 置于 50 ml 離心管中。
2. 加入 40 ml 滅菌水，充分混合溶解后，定容至 50 ml。
3. 用 0.22 μm 濾器過濾除菌。
4. 小份分裝（1 ml/份）后，-20℃保存。
IPTG
(24 mg/ml)
· 組份濃度 24 mg/ml IPTG
· 配制量 50 ml
· 配制方法 1. 稱量 1.2 g IPTG 置于 50 ml 離心管中。
2. 加入 40 ml 滅菌水，充分混合溶解后，定容至 50 ml。
3. 用 0.22 μm 濾器過濾除菌。
4. 小份分裝（1 ml/份）后，-20℃保存。
X-Gal
(20 mg/ml)
· 組份濃度 20 mg/ml X-Gal
· 配制量 50 ml
· 配制方法 1. 稱量 1 g X-Gal 置于 50 ml 離心管中。
2. 加入 40 ml DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，
定容至 50 ml。
3. 小份分裝（1 ml/份）后，-20℃避光保存。
· 組份濃度 1%（W/V）Tryptone，0.5%（W/V）Yeast Extract，
1%（W/V）NaCl
· 配制量 1 L
· 配制方法 1. 稱量下列試劑，置于 1 L 燒杯中。
Tryptone 10 g
Yeast Extract 5 g
NaCl 10 g
2. 加入約 800 ml 的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?nbsp;
3. 滴加 5 N NaOH（約 0.2 ml），調(diào)節(jié) pH 值至 7.0。
4. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至 1 L。
5. 高溫高壓滅菌后，4℃保存。
LB/Amp 培養(yǎng)基
· 組份濃度 1%（W/V） Tryptone
0.5%（W/V） Yeast Extract
1%（W/V） NaCl
0.1 mg/ml Ampicillin
· 配制量 1 L
· 配制方法 1. 稱取下列試劑，置于 1 L 燒杯中。
Tryptone 10 g
Yeast Extract 5 g
NaCl 10 g
2. 加入約 800 ml 的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?nbsp;
3. 滴加 5 N NaOH（約 0.2 ml），調(diào)節(jié) pH 值至 7.0。
4. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至 1 L。
5. 高溫高壓滅菌后，冷卻至室溫。
6. 加入 1 ml Ampicillin（100 mg/ml）后均勻混合。
7. 4℃保存。
TB 培養(yǎng)基
· 組份濃度 1.2%（W/V） Tryptone
2.4%（W/V） Yeast Extract
0.4%（V/V） Glycerol
17 mM KH2PO4
72 mM K2HPO4
· 配制量 1 L
· 配制方法 1. 配制磷酸鹽緩沖液（0.17 M KH2PO4，0.72 M K2HPO4）
100 ml。
溶解 2.31 g KH2PO4和 12.54 g K2HPO4于 90 ml 的去
離子水中，攪拌溶解后，加去離子水定容至 100 ml，高
溫高壓滅菌。
2. 稱取下列試劑，置于 1 L 燒杯中。
Tryptone 12 g
Yeast Extract 24 g
Glycerol 4 ml
3. 加入約 800 ml 的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?nbsp;
4. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至 1 L，高溫高壓滅菌。
5. 待溶液冷卻至 60℃以下時(shí)，加入 100 ml 的上述滅菌磷
酸鹽緩沖液。
6. 4℃保存。
TB/Amp 培養(yǎng)基
· 組份濃度 1.2%（W/V） Tryptone
2.4%（W/V） Yeast Extract
0.4%（V/V） Glycerol
17 mM KH2PO4
72 mM K2HPO4
0.1 mg/ml Ampicillin
· 配制量 1 L
· 配制方法 1. 配制磷酸鹽緩沖液（0.17 M KH2PO4，0.72 M K2HPO4）
100 ml。
溶解 2.31 g KH2PO4和 12.54 g K2HPO4于 90 ml 的去
離子水中，攪拌溶解后，加去離子水定容至 100 ml，高
溫高壓滅菌。
2. 稱取下列試劑，置于 1 L 燒杯中。
Tryptone 12 g
Yeast Extract 24 g
Glycerol 4 ml
2. 加入約 800 ml 的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?nbsp;
3. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至 1 L 后，高溫高壓滅菌。
4. 待溶液冷卻至 60℃以下時(shí)，加入 100 ml 的上述滅菌磷
酸鹽緩沖液和 1 ml 的 Ampicillin（100 mg/ml）。
5. 均勻混合后 4℃保存。
SOB 培養(yǎng)基
· 組份濃度 2%（W/V） Tryptone
0.5%（W/V） Yeast Extract
0.05%（W/V） NaCl
2.5 mM KCl
10 mM MgCl2
· 配制量 1 L
· 配制方法 1. 配制 250 mM KCl 溶液。
在 90 ml 的去離子水中溶解 1.86 g KCl 后，定容至 100
ml。
2. 配制 2 M MgCl2溶液。
在90 ml 去離子水中溶解19 g MgCl2后，定容至100 ml，
高溫高壓滅菌。
3. 稱取下列試劑，置于 1 L 燒杯中。
Tryptone 20 g
Yeast Extract 5 g
NaCl 0.5 g
4. 加入約 800 ml 的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?nbsp;
5. 量取 10 ml 250 mM KCl 溶液，加入到燒杯中。
6. 滴加 5 N NaOH 溶液（約 0.2 ml），調(diào)節(jié) pH 值至 7.0。
7. 加入去離子水將培養(yǎng)基定容至 1 L。
8. 高溫高壓滅菌后，4℃保存。
9. 使用前加入 5 ml 滅菌的 2 M MgCl2溶液。
· 組份濃度 2%（W/V） Tryptone
0.5%（W/V） Yeast Extract
0.05%（W/V） NaCl
2.5 mM KCl
10 mM MgCl2
20 mM 葡萄糖
· 配制量 100 ml
· 配制方法 1. 配制 1 M 葡萄糖溶液。
將 18 g 葡萄糖溶于 90 ml 去離子水中，充分溶解后定
容至 100 ml，用 0.22 μm 濾器過濾除菌。
2. 向 100 ml SOB 培養(yǎng)基中加入除菌的 1 M 葡萄糖溶液 2
ml，均勻混合。
3. 4℃保存。
· 組份濃度 2%（W/V）Tryptone，0.5%（W/V）Yeast Extract，
0.5%（W/V）MgSO4·7H2O
· 配制量 1 L
· 配制方法 1. 稱取下列試劑，置于 1 L 燒杯中。
Tryptone 20 g
Yeast Extract 5 g
MgSO4·7H2O 5 g
2. 加入約 800 ml 的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?nbsp;
3. 滴加 1 N KOH，調(diào)節(jié) pH 值至 7.5。
4. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至 1 L。
5. 高溫高壓滅菌后，4℃保存。
NZCYM 培養(yǎng)基
· 組份濃度 0.5%（W/V） Yeast Extract
0.1%（W/V） Casamino Acid
1%（W/V） NZ 胺
0.5%（W/V） NaCl
0.2%（W/V） MgSO4·7H2O
· 配制量 1 L
· 配制方法 1. 稱取下列試劑，置于 1 L 燒杯中。
Yeast Extract 5 g
Casamino Acid 1 g
NZ 胺 10 g
NaCl 5 g
MgSO4·7H2O 2 g
2. 加入約 800 ml 的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?nbsp;
3. 滴加 5 N NaOH（約 0.2 ml），調(diào)節(jié) pH 值至 7.0。
4. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至 1 L。
5. 高溫高壓滅菌后，4℃保存。
NZYM 培養(yǎng)基
· 組份濃度 0.5%（W/V） Yeast Extract
1%（W/V） NZ 胺
0.5%（W/V） NaCl
0.2%（W/V） MgSO4·7H2O
· 配制方法 NZYM 培養(yǎng)基除不含 Casamino Acid（酪蛋白氨基酸）外，
其他成份與 NZCYM 培養(yǎng)基相同。
NZM 培養(yǎng)基
· 組份濃度 1%（W/V） NZ 胺
0.5%（W/V） NaCl
0.2%（W/V） MgSO4·7H2O
· 配制方法 NZM 培養(yǎng)基除不含 Yeast Extract（酵母提取物）外，其他
成份與 NZYM 培養(yǎng)基相同。
一般固體培養(yǎng)基的配制
· 配制方法 1. 按照液體培養(yǎng)基配方準(zhǔn)備好液體培養(yǎng)基，在高溫高壓滅
菌前，加入下列試劑中的一種。
Agar（瓊脂：鋪制平板用） 15 g/L
Agar（瓊脂：配制頂層瓊脂用） 7 g/L
Agarose（瓊脂糖：鋪制平板用） 15 g/L
Agarose（瓊脂糖：配制頂層瓊脂用） 7 g/L
2. 高溫高壓滅菌后，戴上手套取出培養(yǎng)基，搖動(dòng)容器使瓊
脂或瓊脂糖充分混勻（此時(shí)培養(yǎng)基溫度很高，小心燙傷）。
3. 待培養(yǎng)基冷卻至 50～60℃時(shí)，加入熱不穩(wěn)定物質(zhì)（如抗
生素等），搖動(dòng)容器充分混勻。
4. 鋪制平板（30～35 ml 培養(yǎng)基/90 mm 培養(yǎng)皿）。
LB/Amp/X-Gal/IPTG
平板培養(yǎng)基
· 組份濃度 1%（W/V） Tryptone
0.5%（W/V） Yeast Extract
1%（W/V） NaCl
0.1 mg/ml Ampicillin
0.024 mg/ml IPTG
0.04 mg/ml X-Gal
1.5%（W/V） Agar
· 配制量 1 L
· 配制方法 1. 稱取下列試劑，置于 1 L 燒杯中。
Tryptone 10 g
Yeast Extract 5 g
NaCl 10 g
2. 加入約 800 ml 的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?nbsp;
3. 滴加 5 N NaOH（約 0.2 ml），調(diào)節(jié) pH 值至 7.0。
4. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至 1 L 后，加入 15 g Agar。
5. 高溫高壓滅菌后，冷卻至 60℃保存。
6. 加入 1 ml Ampicillin（100 mg/ml）、1 ml IPTG（24
mg/ml）、2 ml X-Gal（20 mg/ml）后均勻混合。
7. 鋪制平板（30～35 ml 培養(yǎng)基/90 mm 培養(yǎng)皿）。
8. 4℃避光保存。
TB/Amp/X-Gal/IPTG
平板培養(yǎng)基
· 組份濃度 1.2%（W/V） Tryptone
2.4%（W/V） Yeast Extract
0.4%（W/V） Glycerol
17 mM KH2PO4
72 mM K2HPO4
0.1 mg/ml Ampicillin
0.024 mg/ml IPTG
0.04 mg/ml X-Gal
1.5%（W/V） Agar
· 配制量 1 L
· 配制方法 1. 配制磷酸鹽緩沖液（0.17 M KH2PO4，0.72 M K2HPO4）
100 ml。
溶解 2.31 g KH2PO4和 12.54 g K2HPO4于 90 ml 的去
離子水中，攪拌溶解后，加去離子水定容至 100 ml，高
溫高壓滅菌。
2. 稱取下列試劑，置于 1 L 燒杯中。
Tryptone 12 g
Yeast Extract 24 g
Glycerol 4 ml
3. 加入約 800 ml 的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?nbsp;
4. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至 1 L 后，加入 15 g Agar。
5. 高溫高壓滅菌后，冷卻至 60℃保存。
6. 加入 100 ml 的上述滅菌磷酸鹽緩沖液、1 ml Ampicillin
（100 mg/ml）、1 ml IPTG（24 mg/ml）、2 ml X-Gal
（20 mg/ml）后均勻混合。
7. 鋪制平板（30～35 ml 培養(yǎng)基/90 mm 培養(yǎng)皿）。
8. 4℃避光保存。
Ampicillin
(100 mg/ml)
Concentration of 100 mg/ml Ampicillin
Volume 50 ml
Preparation method 1. weighing 5 g Ampicillin placed in 50 ml centrifuge tube.
2. add 40 ml of sterilized water, mix and dissolve fully, then fix it to 50 ml.
3. a 0.22 mu m filter was used to filter the bacteria.
4. fractions (1 ml/) were stored at -20 C.
IPTG
(24 mg/ml)
Concentration of 24 mg/ml IPTG
Volume 50 ml
Preparation method 1. weighing 1.2 g IPTG placed in 50 ml centrifuge tube.
2. add 40 ml of sterilized water, mix and dissolve fully, then fix it to 50 ml.
3. a 0.22 mu m filter was used to filter the bacteria.
4. fractions (1 ml/) were stored at -20 C.
X-Gal
(20 mg/ml)
Concentration of 20 mg/ml X-Gal
Volume 50 ml
Preparation method 1. weighing 1 g X-Gal placed in 50 ml centrifuge tube.
2. add 40 ml DMF (two methyl formamide), mix and dissolve fully.
Set the capacity to 50 ml.
3. after a small package (1 ml/), -20 was stored away from light.
LB medium
The component concentration is 1% (W/V) Tryptone, 0.5% (W/V) Yeast Extract,
1% (W/V) NaCl
Volume 1 L
Preparation method 1. weighing the following reagents, placed in the 1 L beaker.
Tryptone 10 g
Yeast Extract 5 g
NaCl 10 g
2. add about 800 ml of deionized water, stirring and dissolving.
3. drops plus 5 N NaOH (about 0.2 ml), adjusting pH value to 7.
4. with deionized water, the medium is fixed to 1 L.
After 5. high temperature and high pressure sterilization, it is preserved at 4.
LB/Amp medium
Component concentration 1% (W/V) Tryptone
0.5% (W/V) Yeast Extract
1% (W/V) NaCl
0.1 mg/ml Ampicillin
Volume 1 L
The preparation method 1. says the following reagents are placed in the 1 L beaker.
Tryptone 10 g
Yeast Extract 5 g
NaCl 10 g
2. add about 800 ml of deionized water, stirring and dissolving.
3. drops plus 5 N NaOH (about 0.2 ml), adjusting pH value to 7.
4. with deionized water, the medium is fixed to 1 L.
After 5. high temperature and high pressure sterilization, it is cooled to room temperature.
6. add 1 ml Ampicillin (100 mg/ml) and mix evenly.
Save at 7.4 C.
TB medium
Component concentration 1.2% (W/V) Tryptone
2.4% (W/V) Yeast Extract
0.4% (V/V) Glycerol
17 mM KH2PO4
72 mM K2HPO4
Volume 1 L
Preparation method 1. phosphate buffer solution (0.17 M KH2PO4, 0.72 M K2HPO4).
100 ml.
Dissolve 2.31 g KH2PO4 and 12.54 g K2HPO4 at 90 mL.
In ionic water, after stirring and dissolving, add deionized water to 100 ml.
Temperature and high pressure sterilization.
2. are called the following reagents and placed in the 1 L beaker.
Tryptone 12 g
Yeast Extract 24 g
Glycerol 4 ml
3. add about 800 ml of deionized water, stirring and dissolving.
4. add deionized water to the medium for 1 L and sterilize at high temperature and high pressure.
5. when the solution is cooled to below 60 C, the above 100 ml of sterilized phosphorus can be added.
Acid salt buffer.
Save at 6.4 C.
TB/Amp medium
Component concentration 1.2% (W/V) Tryptone
2.4% (W/V) Yeast Extract
0.4% (V/V) Glycerol
17 mM KH2PO4
72 mM K2HPO4
0.1 mg/ml Ampicillin
Volume 1 L
Preparation method 1. phosphate buffer solution (0.17 M KH2PO4, 0.72 M K2HPO4).
100 ml.
Dissolve 2.31 g KH2PO4 and 12.54 g K2HPO4 at 90 mL.
In ionic water, after stirring and dissolving, add deionized water to 100 ml.
Temperature and high pressure sterilization.
2. are called the following reagents and placed in the 1 L beaker.
Tryptone 12 g
Yeast Extract 24 g
Glycerol 4 ml
2. add about 800 ml of deion