微生物培養(yǎng)基研發(fā)過程中菌種分離的常用方式
發(fā)布時間：
2022-12-27
作者：
表面接觸碟培養(yǎng)基
微生物培養(yǎng)基研發(fā)過程中菌種分離的常用方式
稀釋倒平板法(pourplatemethod)
先將待分離的材料用無菌水作一系列的稀釋(如1:10、1:100、1:1,000、1:10,000......),然后分別取不同稀釋液少許,與已熔化并冷卻至50攝氏度左右的瓊脂培養(yǎng)基混合,搖勻后,傾入滅過菌的培養(yǎng)皿中,待瓊脂凝固后,制成可能含菌的瓊脂平板,保溫培養(yǎng)一定時間即可出現(xiàn)菌落.如果稀釋得當,在平板表面或瓊脂培養(yǎng)基中就可出現(xiàn)分散的單個菌落,這個菌落可能就是由一個細菌細胞繁殖形成的.隨后挑取該單個菌落,或重復以上操作數(shù)次,便可得到純培養(yǎng).
涂布平板法(spreadplatemethod)
由于將含菌材料先加到還較燙的培養(yǎng)基中再倒平板易造成某些熱敏感菌的死亡,而且采用稀釋倒平板法也會使一些嚴格好氧菌因被固定在瓊脂中間缺乏氧氣而影響其生長,因此在微生物學研究中更常用的純種分離方法是涂布平板法.其做法是先將已熔化的培養(yǎng)基倒入無菌平皿,制成無菌平板,冷卻凝固后,將一定量的某一稀釋度的樣品懸液滴加在平板表面,再用無菌玻璃涂棒將菌液均勻分散至整個平板表面,經(jīng)培養(yǎng)后挑取單個菌落.
平板劃線法(streakplatemethod)
用接種環(huán)以無菌操作沾取少許待分離的材料,在無菌平板表面進行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續(xù)劃線,微生物細胞數(shù)量將隨著劃線次數(shù)的增加而減少,并逐步分散開來,如果劃線適宜的話,微生物能一一分散,經(jīng)培養(yǎng)后,可在平板表面得到單菌落.
稀釋搖管法(dilutionshakeculturemethod)
用固體培養(yǎng)基分離嚴格厭氧菌有它特殊的地方.如果該微生物暴露于空氣中不立即死亡,可以采用通常的方法制備平板,然后置放在封閉的容器中培養(yǎng),容器中的氧氣可采用化學、物理或生物的方法清除.對于那些對氧氣更為敏感的厭氧性微生物,純培養(yǎng)的分離則可采用稀釋搖管培養(yǎng)法進行,它是稀釋倒平板法的一種變通形式.先將一系列盛無菌瓊脂培養(yǎng)基的試管加熱使瓊脂熔化后冷卻并保持在50攝氏度左右,將待分離的材料用這些試管進行梯度稀釋,試管迅速搖動均勻,冷凝后,在瓊脂柱表面傾倒一層滅菌液體石蠟和固體石蠟的混合物,將培養(yǎng)基和空氣隔開.培養(yǎng)后,菌落形成在瓊脂柱的中間.進行單菌落的挑取和移植,需先用一只滅菌針將液體石蠟--石蠟蓋取出,再用一只毛細管插入瓊脂和管壁之間,吹入無菌無氧氣體,將瓊脂柱吸出,置放在培養(yǎng)皿中,用無菌刀將瓊脂柱切成薄片進行觀察和菌落的移植.