冷凍干燥菌種的轉(zhuǎn)接技術(shù)
發(fā)布時間：
2022-12-27
作者：
冷凍干燥菌種的轉(zhuǎn)接技術(shù)
建議用下列方法恢復(fù)培養(yǎng)冷凍干燥保藏的菌種.
安瓶管開封
步驟一：用浸過70％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管.
步驟二：用火焰將安瓿管頂端加熱.
步驟三：滴無菌水至加熱的安瓿管頂端使玻璃開裂.
步驟四：用挫刀或鑷子敲下已開裂的安瓿管的頂端.
菌株恢復(fù)培養(yǎng)
步驟一：用無菌吸管,吸取0.3至0.5毫升適宜的液體培養(yǎng)基,滴人安瓿管內(nèi),輕輕振蕩,使凍于菌體溶解呈懸浮狀.
步驟二：取0.1～0.2毫升菌體懸浮液,移植于適宜的瓊脂斜面／平板培養(yǎng)基上,剩余的菌液,注入適宜的液體培養(yǎng)基內(nèi),然后在建議的溫度下培養(yǎng).
步驟三：若未能活化,或活化后有疑問時,請于收到菌種1個月內(nèi),通知保藏中心,經(jīng)查證無誤后,即免費補寄.
注意事項
菌種活化前,請將安瓿管保存在6至10的環(huán)境下.
厭氧菌的培養(yǎng),如無特別說明,自開封至接種完成,均需以無氧氣體充填,以保持厭氧狀態(tài).
某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后,延遲期較長,需連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長,此時請將步驟二(2)重復(fù)一次.
液氮超低溫保藏程序：
容器的選擇：使用帶螺旋蓋的2毫升塑料安培瓶.
檢查安培瓶是否滲漏：用0.05%的亞甲基藍(lán)水溶液在4浸泡30-45分鐘,沖洗干凈,棄去含有藍(lán)色染料的安培瓶,其余的安培瓶備用.
打印標(biāo)簽(激光打印).
容器的滅菌：先用蒸餾水漂洗干凈安培瓶,再用蒸餾水在滅菌鍋中121浸泡滅菌15分鐘,干燥并將打印好的標(biāo)簽放入安培瓶中,略擰緊螺旋蓋,再行121滅菌30分鐘.
保藏菌菌齡：處于最大生長量階段或?qū)?shù)生長期后期.
保護劑：選用5-10%的甘油或二甲基亞砜作保護劑.