大腸菌群平板計(jì)數(shù)法常見問題分析
發(fā)布時(shí)間：
2022-12-27
作者：
大腸菌群平板計(jì)數(shù)法常見問題分析
1、VRBA培養(yǎng)相關(guān)問題
問題:所用器皿是否需要滅菌?
答復(fù)不需要.配制培養(yǎng)基所用到的錐形瓶、玻璃棒、勺子等均不需要滅菌,但要求一定要清洗干凈,表面無污漬、無殘留.煮沸完成后,取下錐形瓶,用一般常用的衛(wèi)生紙(軟紙)覆蓋瓶口,用橡皮筋纏繞,待冷卻至適宜溫度即可傾注培養(yǎng)基.在傾注培養(yǎng)基時(shí),須點(diǎn)燃酒精燈,稍微灼燒錐形瓶口.
問題:如何保持“煮沸2分鐘”?
答復(fù)可以用電磁爐或電熱板進(jìn)行加熱煮沸,在該培養(yǎng)基即將煮沸時(shí)調(diào)低溫度.實(shí)際操作時(shí),不需要嚴(yán)格按照此要求進(jìn)行,加熱煮沸數(shù)秒即可.原因：本培養(yǎng)基很難保持煮沸2分鐘,一旦煮沸,則培養(yǎng)基很快上涌、翻騰,若不調(diào)低溫度或立刻采取其他措施,則培養(yǎng)基可在數(shù)秒內(nèi)噴涌出來,嚴(yán)重者可噴涌2米以上、電磁爐周圍1至2米范圍內(nèi)都是培養(yǎng)基飛濺的范圍(實(shí)驗(yàn)室危險(xiǎn)因子之一).
問題:若培養(yǎng)基未用完,是否可以冷藏起來下次用?
答復(fù)不可以.4789.28中已規(guī)定,固體培養(yǎng)基最多允許熔融1次(指的是經(jīng)過高壓滅菌冷卻后的培養(yǎng)基還可以熔融一次后使用).且VRBA培養(yǎng)基冷卻后,再次熔融時(shí)非常容易噴涌,若溫度控制不當(dāng),底部培養(yǎng)基熔融后很快就會(huì)發(fā)生噴涌(即培養(yǎng)基未完全熔融就會(huì)發(fā)生噴涌現(xiàn)象).
問題:傾注完成后是否需要“覆蓋一層”?如何覆蓋?
答復(fù)一般情況下不需要覆蓋.在實(shí)際操作過程中,若檢驗(yàn)員初次接觸該食品(或食品品類),則有必要在傾注培養(yǎng)基后再覆蓋一層(原因是不清楚該樣品是否會(huì)發(fā)生蔓延).而如此往復(fù)測試幾次后,若該樣品或食品品類均不存在蔓延現(xiàn)象,則以后的實(shí)驗(yàn)中都不需要進(jìn)行覆蓋.若重復(fù)多次測試后都有蔓延現(xiàn)象,則以后的檢驗(yàn)中最好都進(jìn)行覆蓋,最好是在原培養(yǎng)基已凝固或半凝固(不會(huì)發(fā)生晃動(dòng))時(shí)再傾注一層培養(yǎng)基(“一層”是指緩慢傾注培養(yǎng)基至培養(yǎng)基剛好能夠覆蓋整個(gè)平皿).
問題:如何確定培養(yǎng)基上長的是不是大腸菌群?
答復(fù)建議新手們認(rèn)真按照標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行證實(shí)試驗(yàn),此證實(shí)試驗(yàn)簡單易操作,每一次VRBA上有菌落生長都進(jìn)行證實(shí)試驗(yàn),如此往復(fù)3-4次,對于哪種形態(tài)才是大腸菌群已經(jīng)能夠了然于心.
問題:兩個(gè)梯度都長了菌,如何選取?
答復(fù)選取15-150CFU之間的平板(指的是VRBA平板上所有菌落數(shù)在此范圍),挑取可疑菌落進(jìn)行證實(shí)試驗(yàn).詳細(xì)舉例說明：若有兩個(gè)連續(xù)梯度的4個(gè)平板上菌落數(shù)均在15-150之間,則4個(gè)平板上的菌落都要挑取進(jìn)行證實(shí)試驗(yàn),實(shí)際操作時(shí),可靈活操作,如：1:10的兩個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為120、123,1:100的兩個(gè)平板的菌落數(shù)分別為16、18,嚴(yán)格來講必須至少在每個(gè)平板上分別挑取5個(gè)可疑菌落、5個(gè)典型菌落進(jìn)行證實(shí)試驗(yàn),如此需要40根GBLB肉湯管.建議使用鎳合金接種環(huán)(即傳統(tǒng)的接種環(huán),而不是一次性塑料接種環(huán)),因?yàn)閂RBA上生長的菌落(無論典型或可疑)大部分長在底層、且菌落一般較大,被培養(yǎng)基覆蓋,傳統(tǒng)的接種環(huán)較細(xì),用以刮去上層培養(yǎng)基較方便,挑取菌落也較方便.
問題:如何進(jìn)行證實(shí)試驗(yàn)?菌落選取數(shù)量?
答復(fù)同上所述,建議新手們VRBA上的所有不同形態(tài)的菌落都進(jìn)行證實(shí)試驗(yàn).每種不同形態(tài)都挑取5-10個(gè)進(jìn)行證實(shí)試驗(yàn)(若BGLB管足夠,建議多挑取幾個(gè)進(jìn)行試驗(yàn)).
注意：A.每種可疑菌落挑取5個(gè),每個(gè)菌落放入1管GBLB管中;B.“產(chǎn)氣者,記為大腸菌群陽性管”,就要求在實(shí)驗(yàn)前須認(rèn)真篩選BGLB管,凡產(chǎn)氣的GBLB管應(yīng)棄去不用.
問題:結(jié)果如何計(jì)算?
答復(fù)首先,在VRBA培養(yǎng)24h后進(jìn)行計(jì)數(shù),分別計(jì)數(shù)可疑大腸菌群和典型大腸菌群(何為可疑、何為典型?同“2”,檢驗(yàn)員多進(jìn)行幾次實(shí)驗(yàn)后自然很清楚典型的大腸菌群是何種形態(tài))的數(shù)量.假如在1:10的平板上可疑大腸菌群有10個(gè),典型大腸菌群有6個(gè);其次,進(jìn)行證實(shí)試驗(yàn),挑取上述可疑和典型大腸菌群各5個(gè)(或者全部挑取),假如10個(gè)可疑大腸菌群中有3個(gè)證實(shí)為陽性,6個(gè)典型大腸菌群中有5個(gè)證實(shí)為陽性,則計(jì)算方法如下：最終大腸菌群數(shù)=經(jīng)證實(shí)的大腸菌群數(shù)=可疑大腸菌群經(jīng)證實(shí)的數(shù)量+典型大腸菌群經(jīng)證實(shí)的數(shù)量=10×(6/10)×10+6×(5/6)×10=110.
問題:若平板上很多菌落,最終證實(shí)全部為陰性,結(jié)果如何計(jì)算?
答復(fù)根據(jù)第3條,選取適宜菌落數(shù)的平板挑取菌落進(jìn)行證實(shí)試驗(yàn),若證實(shí)全部為陰性,則需要再挑取更低稀釋度的平板上的菌落(建議可疑和典型菌落分別挑取10個(gè))進(jìn)行證實(shí)試驗(yàn),若第二次證實(shí)試驗(yàn)均呈陰性,以＜1乘以最低稀釋度進(jìn)行計(jì)算,如：1:10的平板菌落數(shù)分別為120、123,1:100的平板上菌落數(shù)分別為16、18,首先挑取1:100的兩個(gè)平板上的菌落進(jìn)行證實(shí)試驗(yàn),若全部為陰性,再挑取1:10的兩個(gè)平板上的菌落進(jìn)行證實(shí)試驗(yàn),若1:10的平板上的菌落數(shù)證實(shí)為陰性,則最終計(jì)算過程為＜1x10,最終結(jié)果為＜10;若1:10的的平板上的菌落有陽性管,則按照第5條進(jìn)行計(jì)算.