ATCC菌種保藏辦法之液體石蠟保藏法
發(fā)布時(shí)間：
2022-12-27
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ATCC菌種保藏辦法之液體石蠟保藏法
液體石蠟保藏法
亦稱礦物油保藏法,定期移植保藏法的輔助方法.是指將菌種接種在適宜的斜面培養(yǎng)基上,最適條件下培養(yǎng)至菌種長(zhǎng)出健壯菌落后注入滅菌的液體石蠟,使其覆蓋整個(gè)斜面,再直立放置于低溫(4-6)干燥處進(jìn)行保存的一種菌種保藏方法.
實(shí)驗(yàn)操作步驟如下:
步驟一：液體石蠟的準(zhǔn)備
選用優(yōu)質(zhì)化學(xué)純液體石蠟,將液體石蠟分裝加塞,用牛皮紙包好,采用以下兩種方式進(jìn)行滅菌:
121濕熱滅菌30分鐘,置40恒溫箱中蒸發(fā)水分,經(jīng)無(wú)菌檢查后備用.
160干熱滅菌2個(gè)小時(shí),冷卻后,經(jīng)無(wú)菌檢查后備用.
步驟二：斜面培養(yǎng)物的制備
參照定期移植法.
步驟三：灌注石蠟
將無(wú)菌的液體石蠟在無(wú)菌條件下注入培養(yǎng)好的新鮮斜面培養(yǎng)物上,液面高出斜面頂部25px左右,使菌體與空氣隔絕.
步驟四：保藏
注入液體石蠟的菌種斜面以直立狀態(tài)置低溫(4-6)干燥處保藏,保藏時(shí)間2～10年.
保藏期間應(yīng)定期檢查,如培養(yǎng)基露出液面,應(yīng)及時(shí)補(bǔ)充無(wú)菌的液體石蠟.
步驟五：恢復(fù)培養(yǎng)
恢復(fù)培養(yǎng)時(shí),挑取少量菌體轉(zhuǎn)接在適宜的新鮮培養(yǎng)基上,生長(zhǎng)繁殖后,再重新轉(zhuǎn)接一次.