控制菌檢查:銅綠假單胞桿菌
發(fā)布時(shí)間：
2022-12-27
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控制菌檢查:銅綠假單胞桿菌
供試液的制備和增菌培養(yǎng)
取供試品,按照“非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查制成1:10供試液”.取相當(dāng)于1克或1毫升供試品的供試液,接種至適宜體積（經(jīng)方法適用性實(shí)驗(yàn)確定的）胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中,混勻,30至35攝氏度培養(yǎng)18至24小時(shí).
選擇和分離培養(yǎng)
取上述培養(yǎng)物劃線接種于溴化十六烷基三甲胺瓊脂培養(yǎng)基平板上,30至35攝氏度培養(yǎng)18至72小時(shí).
取上述平板上生長(zhǎng)的菌落進(jìn)行氧化酶試驗(yàn),或采用其它適宜方法進(jìn)一步鑒定.
圖：銅綠假單胞菌在11735-1
銅綠假單胞菌產(chǎn)熒光色素良好,菌落特征典型,菌落大小與國(guó)外知名品牌一致.
3.氧化酶試驗(yàn)
將潔凈濾紙片置于平皿內(nèi),用無(wú)菌玻璃棒取上述平板上生長(zhǎng)的菌落涂于濾紙片上,滴加新配制的1%二鹽酸N,N-二甲基對(duì)苯二胺試液,在30s內(nèi)若培養(yǎng)物呈粉紅色并逐漸變?yōu)樽霞t色為氧化酶陽(yáng)性,否則為陰性.
4結(jié)果判斷
若溴化十六烷基三甲胺瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長(zhǎng),且氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性,應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行適宜的鑒定試驗(yàn),確證是否是銅綠假單胞菌.如果平板上沒(méi)有菌落生長(zhǎng),或雖有菌落生長(zhǎng)但鑒定結(jié)果為陰性,或氧化酶試驗(yàn)陰性,判定供試品未檢出銅綠假單胞菌.
5相關(guān)產(chǎn)品配方
5.1溴化十六烷基三甲胺瓊脂培養(yǎng)基
明膠胰酶水解物 20.0克,硫酸鉀 10.0克,氯化鎂 1.4克,溴化十六烷基三甲銨 0.3克,瓊脂 13.6克,pH7.4±0.2(25攝氏度)
原理:明膠胰酶水解物、甘油提供氮源、維生素和生長(zhǎng)因子;硫酸鉀和氯化鎂有利于銅綠假單胞菌的色素產(chǎn)生;溴化十六烷基三鉀銨為選擇性抑菌劑;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑.
5.2溴化十六烷基三甲胺瓊脂培養(yǎng)基適用性檢查
5.2.1培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力檢查：用涂布法分別接種不大于100cfu的銅綠假單胞菌于溴化十六烷基三甲胺瓊脂培養(yǎng)基平板上,在不超過(guò)18h 30至35攝氏度培養(yǎng)下,銅綠假單胞菌在被檢培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落大小、形態(tài)特征應(yīng)與對(duì)照培養(yǎng)基一致.
5.2.2培養(yǎng)基抑制能力檢查：接種不少于100cfu大腸埃希氏菌于溴化十六烷基三甲胺瓊脂培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基中,在超過(guò)72h 30至35攝氏度培養(yǎng)下,大腸埃希氏菌不得生長(zhǎng).