三糖鐵(TSI)瓊脂培養(yǎng)基原理和用途是什么
發(fā)布時間：
2022-12-24
作者：
國內(nèi)細菌培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家
三糖鐵(TSI)瓊脂培養(yǎng)基
三糖鐵(TSI)瓊脂培養(yǎng)基用途:用于腸桿菌科細菌生化實驗
三糖鐵(TSI)瓊脂培養(yǎng)基組成成分:
胨 20.0克;牛肉浸出粉 5.0克;氯化鈉 5.0克;乳糖 10.0克;蔗糖 10.0克;葡萄糖 1.0克; 硫酸亞鐵 0.2克;硫代硫酸鈉0.2克;酚磺酞 0.025克;瓊脂 12.0克; pH7.3±0.1(25℃)
TSI培養(yǎng)基原理:
細菌的鑒別歸根結(jié)底是根據(jù)該種細菌能夠水解、利用那些化合物.TSI培養(yǎng)基的鑒別依據(jù)是腸桿菌發(fā)酵3種糖類(即葡萄糖、乳糖、蔗糖)的能力和H2S生成能力,或者 說是四種代謝反應(yīng):葡萄糖發(fā)酵、乳糖和(或)蔗糖發(fā)酵、硫化物(這里指硫化鐵)生成、氨基酸氧化脫氨作用.
三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基采用的是斜面培養(yǎng)法,即三糖鐵斜面,提供兩種氧氣環(huán)境:有氧的培養(yǎng)基表面(斜面,slant)和缺少氧氣的培養(yǎng)基 深處(試管底部,butt).
葡萄糖發(fā)酵產(chǎn)酸量很少,只能影響局部的pH值.培養(yǎng)基中的葡萄糖含量很少,葡萄糖被耗盡后,不能發(fā)酵乳糖糖和蔗糖的腸桿菌繼而以 蛋白胨為碳源.氨基酸氧化脫氨產(chǎn)生NH3,使培養(yǎng)基斜面處呈堿性.能夠發(fā)酵乳糖和(或)蔗糖的腸桿菌在無氧條件下能夠產(chǎn)大量的酸 ,使整個培養(yǎng)基呈酸性.有的菌種發(fā)酵糖類時還產(chǎn)氣(主要為二氧化碳),表現(xiàn)為瓊脂培養(yǎng)基出現(xiàn)斷裂或有氣泡.硫化氫在堿性條件下 與鐵離子生成黑色沉淀-Fe2S3 ,使培養(yǎng)基變黑.但酸性條件下,Fe2S3不穩(wěn)定,硫化氫則以氣體形式被釋放.因此對于快速產(chǎn)酸的 微生物,H2S生成可能被掩蔽.
酚紅是酸堿指示劑,變色范圍:pH6.6(黃色)~pH8.4(紅色) .中性條件下顯紅色,當(dāng)pH>8.4,變成紫紅色.
蔗糖有助于大腸菌的快速檢測,鑒于其發(fā)酵蔗糖的速度高于發(fā)酵乳糖的速度.另外,某些革蘭氏陰性菌不能夠發(fā)酵乳糖,只能發(fā)酵蔗糖 .
硫代硫酸根離子為H2S生成反應(yīng)提供底物.
鐵鹽(硫酸亞鐵或檸檬酸鐵銨)是H2S指示劑,與H2S反應(yīng)生產(chǎn)黑色沉淀.培養(yǎng)基變黑證明有H2S生成.值得注意的是,對于TSI培養(yǎng)基來 說,這一結(jié)論的反向推論是不成立的,即培養(yǎng)基沒有變黑并不能證明沒有H2S生成.原因見上文.
牛肉提取物和酵母提取物為細菌生長提供微量元素和生長因子.氯化維持培養(yǎng)基的滲透壓平衡.
蛋白胨作為主要氮源,也是非發(fā)酵型微生物的碳源.對于不能利用乳糖和蔗糖的微生物,當(dāng)直接碳源葡萄糖耗盡后蛋白胨也作為碳源.
接種方法:
1. 將三糖鐵瓊脂制備成較短的斜面,使試管底部至斜面的距離增大,試管口用松散透氣的棉塞塞住,不能堵死管口.以上處理的目的是獲得缺氧與有氧兩種培養(yǎng)環(huán)境.
2. 從選擇性培養(yǎng)基上的單菌落中心處挑菌(越靠菌落中心的細胞越年輕),先用接種針穿刺接種到試管底部(必須接種到最底部,否則結(jié)果無效),抽出接種針,在斜面上劃線接種.
3. 將接種后的試管置于培養(yǎng)箱中,35-37ºC,有氧,培養(yǎng)18-24h.觀察結(jié)果.