埃希氏大腸菌定義和檢驗方法
發(fā)布時間：
2022-12-24
作者：
脫水干燥粉末培養(yǎng)基
埃希氏大腸菌及檢驗
一、定義:
大腸埃希氏菌習(xí)慣稱為大腸桿菌,分類于腸桿菌科,歸屬于埃希氏菌屬,并且大腸桿菌株ATCC 11775是該屬的模式菌種.大腸桿菌的不同菌株間DNA相關(guān)性為80%,而與同科的志賀氏菌屬(除鮑氏志賀氏菌外)的DNA相關(guān)性可達(dá)80-87%.與人類疾病有關(guān)的大腸桿菌,統(tǒng)稱為致瀉性大腸桿菌(此名稱不易與致病性大腸桿菌相混淆),一般包括五種:即腸毒素性大腸桿菌(ETEC)、致病性大腸桿菌(EPEC)、出血性大腸桿菌(EHEC)、侵襲性大腸桿菌(EIEC)和粘附性大腸桿菌(EAEC).
二、生物學(xué)特性:
基本形態(tài)特征:
此菌為兩端鈍圓的短小桿菌,一般大小約0.5μ-0.8μm*1.0μm-3.0μm,因生長條件不同,個別菌體可呈近似球狀或長絲狀.此菌多單獨存在或成雙,但不呈長鏈狀排列.約有50%左右的菌株具有周生鞭毛而能運動,但多數(shù)菌體只有1-4根,一般不超過10根,故菌體動力弱;多數(shù)菌株生長有比鞭毛細(xì)、短、直且數(shù)量多的菌毛,有的菌株具有莢膜或微莢膜;不形成芽胞,對普通堿性染料著色良好,革蘭氏染色陰性.
培養(yǎng)特征:
由于此菌合成代謝能力強,在含無機鹽、胺鹽、葡萄糖的普通培養(yǎng)基上生長良好.最適生長溫度為37攝氏度,在42-44攝氏度條件下仍能生長,生長溫度范圍為15-46攝氏度.在普通營養(yǎng)瓊脂上生長表現(xiàn)3種菌落形態(tài):(1)光滑型: 菌落邊緣整齊,表面有光澤、濕潤、光滑、呈灰色,在生理鹽水中容易分散.(2)粗糙型:菌落扁平、干澀、邊緣不整齊,易在生理鹽水中自凝.(3)粘液型:常為含有莢膜的菌株.此菌兼性厭氧,在有氧條件下生長良好,最適生長pH為6.8-8.0,所用培養(yǎng)基pH為7.0-7.5,若pH值低于6.0或高于8.0則生長緩慢.
生化反應(yīng)與血清學(xué)反應(yīng)
大腸桿菌屬于衛(wèi)生學(xué)意義的大腸菌群和糞大腸菌群的范疇,因此,必須符合大腸菌群和糞大腸菌群的有關(guān)定義,在檢測大腸菌群、糞大腸菌群的基礎(chǔ)上,可以應(yīng)用I(吲哚)、M(甲基紅)、Vi(3羥基-2-丁酮)、C(檸檬酸)即IMViC生化試驗對大腸桿菌作進一步鑒定,其IMViC結(jié)果為++--或-+--.生化反應(yīng)是鑒定大腸桿菌的主要方法之一,然而,大腸桿菌之間生化反應(yīng)的差異非常常見,象:許多菌種非/遲發(fā)酵乳糖,但并不說明它們遺傳上有明顯不同,生化反應(yīng)非典型的大腸桿菌菌株與典型菌株的DNA相關(guān)性在85%-100%.附表1為大腸桿菌生化反應(yīng)特性表.其中H2S、脲酶、阿糖酸、吲哚、ONPG試驗常為選生化反應(yīng),其余為進一步的生化試驗.大腸桿菌在賴氨酸脫羧酶、粘質(zhì)酸鹽、醋酸鹽生化試驗中,有一項或多項試驗陽性,且厭氧性生長弱,有動力和吲哚試驗陽性可與志賀氏菌相鑒別.
大腸桿菌的血清學(xué)反應(yīng),往往是對經(jīng)分離、鑒定、確證為大腸桿菌的進一步分型,常不作為常規(guī)方法使用.附表2所列主要致瀉性大腸桿菌的血清型.對大腸桿菌的分型鑒定工作,基層檢驗單位若有要求時,可與各地所屬出入境檢驗檢疫局實驗室聯(lián)系,委托進行血清學(xué)鑒定工作.
三、大腸桿菌的抵抗力:
此菌對理化因素的抵抗力,在無芽胞菌中是最強的一種,在室溫可存活數(shù)周,在土壤、水中存活數(shù)月,耐寒力強,但是在30分鐘內(nèi)快速冷凍,將37攝氏度降至4攝氏度的過程,可殺死此菌.加熱60攝氏度,30分鐘,此菌可滅活.對漂白粉,酚、甲醛等較敏感,水中1ppb氯可殺死此菌.此菌耐膽鹽,在一定程度上能抵抗煌綠等染料的抑菌作用,在選擇性培養(yǎng)基配制上,常利用此菌這一性質(zhì).
四、衛(wèi)生學(xué)意義與流行學(xué)
由于大腸桿菌是人及各種動物腸道中的正常寄居菌,常隨糞便從人及動物體排出,廣泛散播于自然界,所以一旦檢出大腸桿菌,即意味著直接或間接地被糞便污染,而在衛(wèi)生學(xué)上被用于飲水,牛奶或食品等的糞源性污染衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)指標(biāo);并且由于大腸桿菌在外界存活時間與一些主要腸道病原菌相近,它的出現(xiàn)也可能預(yù)示著某些腸道病原菌(例:沙門氏菌、志賀氏菌)的存在,因此該細(xì)菌是國際上公認(rèn)的衛(wèi)生監(jiān)測指示菌.近來,有些國家在執(zhí)行HACCP管理中,將大腸桿菌檢測作為微生物污染狀況的監(jiān)測指標(biāo)和HACCP實施效果的評估指標(biāo).
致瀉性大腸桿菌是引起人體以腹瀉癥狀為主的全球性疾病,其中尤以EPEC、ETEC所占比例為大.附表3是我國部分省市主要腹瀉病原體檢出率情況,盡管目前報道各地主要腹瀉病是由志賀氏菌或輪狀病毒引起的,但是,多年來,致瀉性大腸桿菌引起的腹瀉病例始終位于第二位,可見大腸桿菌腸道傳染的廣泛性.還有,致瀉性大腸桿菌亦可常年引發(fā)人體腹瀉,以夏秋季為高峰,在患者感染住院率中,嬰幼兒占60%以上.近來,EHEC O157:H7為世界衛(wèi)生組織(WHO)定為新的食源性致病菌,其引發(fā)的出血性腸炎的暴發(fā)或散發(fā)病例,自1983年以來在北美州(美國、加拿大)地區(qū)逐年增多,英國、日本亦有爆發(fā)和散發(fā)病例報道,我國也發(fā)現(xiàn)散發(fā)病例,尚未有爆發(fā)EHEC的報道.附表4為近幾年EHEC的污染狀況.
五、大腸桿菌檢驗程序圖解:
LST肉湯
37攝氏度,48h
LST肉湯管陽性 (疑似大腸菌群)37攝氏度,48h
EC肉湯44攝氏度,24h EC肉湯產(chǎn)氣管為陽性(糞大腸菌群)
陽性管再培養(yǎng)24h
EMB平板分離
37攝氏度,24h黑色菌落移種營養(yǎng)瓊脂斜面
LST肉湯 IMViC生化試驗革蘭氏染色
產(chǎn)酸產(chǎn)氣 ++--/-+-- 無芽胞G-桿菌
大腸桿菌
說明:
由于大部分致瀉性大腸桿菌在6攝氏度條件中可失去活力,故大腸桿菌的定性檢測比定量檢測更適宜.如果確有大腸桿菌定量檢測要求的話,可用MPN法或終點稀釋法進行.
基層單位如有大腸桿菌生化鑒定要求或大腸桿菌血清學(xué)分型要求,可委托屬地出入境檢驗檢疫局進行檢驗.
檢測大腸桿菌的MUG法和膜過濾法,可參閱有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)說明進行.
國標(biāo)法與FDA方法,在所用培養(yǎng)基、檢驗程序上略有差異,但不影響大腸桿菌檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性.
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Escherichia coli, commonly known as Escherichia coli, is classified in the enterobacteriaceae and belongs to The genus Escherichia coli, and Escherichia coli ATCC 11775 is the model strain of this genus. The DNA correlation between different strains of Escherichia coli was 80%, while the DNA correlation with shigella genera of the same family (except Shigella bauhinia) was up to 80-87%. E. coli associated with human diseases, collectively known as pathogenic E. coli (not to be confused with pathogenic E. coli), generally includes five species: Enterotoxigenic E. coli (ETEC), pathogenic E. coli (EPEC), hemorrhagic E. coli (EHEC), invasive E. coli (EIEC), and adherent E. coli (EAEC).